一種提純酶催化煙酰胺單核苷酸（NMN）粗品的方法

       煙酰胺單核苷酸（NMN）是生物細胞內存在的一種生化物質，是輔酶I的合成底物，它在被煙酰胺核苷酸腺苷轉移酶腺苷化后即變成輔酶I（NAD）。在生物體內NMN的水平和煙酰胺核苷酸腺苷轉移酶（NMMPT）的活性直接影響到NAD的濃度，同時，NMN直接參與體內腺苷轉移，是體內重要的一種合成底物和功能調節物質。在**應用方面，NMN可用于**老、**慢性病等，同時研究表明NMN還對胰島素的分泌起到調節作用，，對mRNA表達水平也有影響。因此，NMN在醫藥**方面有著普遍的應用前景，同時也作為一種反應底物在化工方面有著普遍的市場前景。
      目前，煙酰胺單核苷酸的制備方法主要包括以下三種：1、酵母菌發酵法；2、化學合成法；3、生物催化法。其中化學合成法成本較高而且會產生手性化合物；酵母菌發酵法生產的NMN含有一定的溶劑殘留；生物催化法不含溶劑殘留，也不存在手性問題，是目前綠色環保沒有公害的制備方法。
      現有制備NMN的生物催化法一般是以煙酰胺和5-磷酸核糖-1-α-焦磷酸（PRPP）為底物，在煙酰胺磷酸核糖轉移酶（Nampt）的催化下制備NMN。此方法制得的NMN粗品用離子交換樹脂進行純化，但由于NMN與多種類似物質帶電荷和極性極為相近，導致分離提純有很大的困難，往往無法將其中的類似物雜質完全去除?，F有應用離子交換樹脂進行純化的方法往往只能獲得純度60%的產品，收率在40%左右，生產效率低，成本高，不適合規?；a。
      我們使用的純化方法步驟如下：
      1、首先調粗品的PH值至5.5-6.5，然后將生物催化法制備的煙酰胺單核苷酸粗產物上含有叔基的弱堿性陰離子交換樹脂柱，用水洗脫，收集洗脫液。核酸蛋白檢測儀控制洗脫進程，讀數上升開始收集，待到讀數下降停止收集。
      2、洗脫液經過納濾濃縮/反滲透濃縮，脫除部分鹽，收集洗脫液。
      3、濃縮液上螯合樹脂柱，用水洗脫，收集洗脫液。核酸蛋白檢測儀控制洗脫進程，讀數上升開始收集，待到讀數下降停止收集。
      4、洗脫液ph值調至2.0-2.4，洗脫液濃縮，使得Na離子含量在1%以下，干燥處理（冷凍干燥、噴霧干燥、真空干燥的一種）即得純化后的煙酰胺單核苷酸精品。
      此方法收率為60%以上，NMN的純度到達97%以上。并且此方法綠色環保，工藝簡單容易操作，生產成本低。